Анализ пцр что это такое


ПЦР-анализ: что это такое, когда он назначается и как проводится

Высокотехнологичные лабораторные методы диагностики дают возможность выявить множество заболеваний на самых ранних стадиях. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — один из самых новых и точных способов диагностики. За его разработку ученый Кэри Муллис получил в 1993 году Нобелевскую премию. Сегодня этот метод хотя и считается экспериментальным, но уже широко и успешно применяется в медицине.

ПЦР-диагностика: суть подхода

Метод ПЦР использует принципы молекулярной биологии. Его суть заключается в применении особых ферментов, которые многократно копируют фрагменты РНК и ДНК возбудителей болезни, которые находятся в пробах биоматериала, например в крови.

После этого работники лаборатории сверяют полученные фрагменты с базой данных, выявляют тип возбудителя болезни и его концентрацию.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, охлаждающем и нагревающем пробирки с пробами биоматериала. Нагрев и охлаждение необходимы для проведения репликации. Точность температурного режима влияет на точность результата.

Сферы применения метода

Диагностические возможности метода ПЦР огромны, с его помощью можно выявить самые разные инфекции. Чаще всего ПЦР-метод применяют для диагностики:

  • ВИЧ;
  • герпеса;
  • различных половых инфекций, в частности хламидиоза, уреаплазмоза, гарднереллеза, микоплазмоза и трихомониаза;
  • кандидоза;
  • гепатитов;
  • мононуклеоза;
  • листериоза;
  • цитомегаловируса;
  • туберкулеза;
  • вируса папилломы человека;
  • клещевого энцефалита.

Это далеко не полный список, метод ПЦР-анализа используется в разных областях медицины.

Кстати Метод ПЦР применяется не только в медицинских целях. В наши дни он используется и в иных сферах, например в криминалистике, в тех случаях, когда требуется определить, кому принадлежит найденный на месте преступления биоматериал. ПЦР иногда используется также при установлении отцовства.

Преимущества и недостатки подхода

У диагностики методом ПЦР много плюсов:

Высокая чувствительность. Метод позволяет выявить возбудителя болезни даже при наличии нескольких молекул его ДНК, то есть на очень ранних стадиях, при хронической форме заболевания, а так же в случаях, когда болезнь никак себя не проявляет, протекая латентно.

Универсальность. Для проведения ПЦР анализа подходит почти любой биоматериал — от крови и слюны до клеток кожи.

Широкий охват. Исследование одного образца может выявить сразу нескольких возбудителей болезни.

Оперативность. Результат, как правило, готов через 5–7 часов, то есть получить заключение можно уже на следующий день после забора биоматериала.

Точность. Метод ПЦР практически никогда не дает ложноположительных или ложноотрицательных результатов, если была соблюдена технология проведения этого анализа.

Невысокая стоимость. По цене ПЦР-анализ сравним с любыми другими лабораторными анализами крови.

Однако следует понимать, что совершенных методов анализа не бывает. У ПЦР есть и минус — высокие требования к соблюдению технологии и к профессионализму лаборантов. Если образец был загрязнен, анализ может дать ложный результат. Поэтому проводить ПЦР-диагностику лучше только в самых лучших лабораториях, где внедрены системы контроля качества работы.

Исследуемый биоматериал

Для ПЦР-диагностики заболеваний на анализ берут разные виды биоматериала. Выбор зависит от типа инфекции. При анализе на ЗППП методом ПЦР берут соскоб или мазок из шейки матки или уретры, а также мочу. Для выявления герпеса, цитомегаловируса, гепатита, токсоплазмоза и ВИЧ на анализ берут кровь. При анализе на мононуклеоз и цитомегаловирус берут мазок из зева. Спинномозговая жидкость используется для анализа при поражениях нервной системы, для диагностики внутриутробных инфекций исследуются ткани плаценты, для выявления легочных инфекций — мокрота или плевральная жидкость.

Подготовка к исследованию

Подготовка к ПЦР-диагностике напрямую зависит от типа биоматериала. Кровь сдается натощак утром. Моча также сдается утром, в лабораторных условиях, в стерильный контейнер. Перед сдачей мазка или соскоба из урогенитальной области нельзя вступать в половые контакты за несколько дней до исследования, не следует проводить спринцевания. Мазок или соскоб нельзя сдавать во время менструации и в течение 2-х дней после ее окончания.

Методы ПЦР-диагностики заболеваний

Существует немало различных методик ПЦР-диагностики: ПЦР в реальном времени, секвенирование, пиросеквенирование, микрофлюидные технологии. Сейчас наиболее распространенным способом проведения анализа является ПЦР в реальном времени — этот метод практически не допускает ложноположительных результатов, к тому же срок обработки образцов при исследовании таким способом сокращается — результат можно получить уже через час.

Расшифровка результатов

Для пациента результат ПЦР-анализа может быть либо положительным, либо отрицательным. Отрицательный означает, что следов враждебной ДНК не обнаружено и человек здоров. Положительный подразумевает наличие фрагментов ДНК возбудителя болезни — это значит, что человек заражен и ему требуется лечение.

Нередко ПЦР-диагностика дает положительный результат, но пациент не чувствует никакого недомогания, а признаки болезни отсутствуют. Однако это означает не ошибку, а очень раннюю стадию заболевания. В этом случае необходимы дополнительные исследования и лечение. Если заболевание было диагностировано на столь ранней стадии, следует начинать терапию как можно скорее, ведь чем дальше зайдет болезнь, тем сложнее будет ее вылечить.

ПЦР-диагностика инфекций невероятно точна — она позволяет обнаружить возбудителя болезни, даже если в пробе находится всего одна-единственная молекула его ДНК. Именно это качество сделало ПЦР-анализ одним из эффективнейших диагностических инструментов как для определения наличия инфекции, так и для контроля за ходом лечения.

www.kp.ru

ПЦР: что это такое? Диагностика инфекционных заболеваний методом полимеразной цепной реакции

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

В конце статьи см. словарь Полимеразную цепную реакцию (ПЦР, PCR) изобрёл в 1983 году Кэри Мюллис (американский учёный). Впоследствии он получил за это изобретение Нобелевскую премию. В настоящее время ПЦР-диагностика является, одним из самых точных и чувствительных методов диагностики инфекционных заболеваний. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). В основе метода ПЦР лежит многократное удвоение определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях (in vitro). В результате нарабатываются количества ДНК, достаточные для визуальной детекции. При этом происходит копирование только того участка, который удовлетворяет заданным условиям, и только в том случае, если он присутствует в исследуемом образце. Кроме простого увеличения числа копий ДНК (этот процесс называется амплификацией), ПЦР позволяет производить множество других манипуляций с генетическим материалом (введение мутаций, сращивание фрагментов ДНК), и широко используется в биологической и медицинской практике, например, для диагностики заболеваний (наследственных, инфекционных), для установления отцовства, для клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов.

Специфичность и применение

ПЦР - метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.

ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП). Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью. Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике - для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ - вирусов папилломы человека; в пульмонологии - для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии - для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний - в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии - для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов. Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами - короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 - 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.

Проведение ПЦР

Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:

  • ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
  • два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
  • термостабильная ДНК-полимераза;
  • дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
  • ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
  • буферный раствор.

ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции. Ход реакции

Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Двухцепочечную ДНК-матрицу нагревают до 94 - 96°C (или до 98°C, если используется особенно термостабильная полимераза) на 0,5 - 2 минуты, чтобы цепи ДНК разошлись. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров.

Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Температура отжига зависит от праймеров и обычно выбирается на 4 - 5°С ниже их температуры плавления. Время стадии — 0,5 - 2 минут.

ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы. Часто используемые полимеразы наиболее активны при 72°C. Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин.

Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Известно, что в лабораторной диагностике большинство ошибок (до 70%) совершается именно на этапе пробоподготовки. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО  в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации (загрязнения) материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.

Словарь

ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота - биологический полимер, один из двух типов нуклеиновых кислот, обеспечивающих хранение, передачу из поколения в поколение и реализацию генетической программы развития и функционирования живых организмов. Основная роль ДНК в клетках — долговременное хранение информации о структуре РНК и белков.

РНК– рибонуклеиновая кислота - биологический полимер, близкий по своему химическому строению к ДНК. Молекула РНК построена из тех же мономерных звеньев - нуклеотидов, что и ДНК. В природе РНК, как правило, существует в виде одиночной цепочки. У некоторых вирусов РНК является носителем генетической информации. В клетке играет важную роль при передаче информации от ДНК к белку. РНК синтезируется на ДНК-матрице. Процесс этот называется транскрипцией. В ДНК имеются участки, где содержится информация, ответственная за синтез трех видов РНК, различающихся по выполняемым функциям: информационной или матричной РНК (мРНК), рибосомальной (рРНК) и транспортной (тРНК). Все три вида РНК тем или иным способом участвуют в синтезе белка. Однако информация по синтезу белка содержится только в мРНК.

Нуклеоти́ды - основная повторяющаяся единица в молекулах нуклеиновых кислот, продукт химического соединения азотистого основания, пятиуглеродного сахара (пентозы) и одной или нескольких фосфатных групп. Нуклеотиды, представленные в нуклеиновых кислотах, содержат одну фосфатную группу. Они называются по содержащемуся в них азотистому основанию - адениновый (A), содержащий аденин, гуаниновый (G) - гуанин, цитозиновый (C) - цитозин, тиминовый (Т) - тимин, урациловый (U) - урацил. В состав ДНК входят 4 типа нуклеотидов - A, T, G, C, в состав РНК также 4 типа - A, U, G, C. Сахаром в составе всех нуклеотидов ДНК является дезоксирибоза, РНК - рибоза. При образовании нуклеиновых кислот нуклеотиды, связываясь, образуют сахаро-фосфатный остов молекулы, по одну сторону которого находятся основания.

Праймер – котроткая ДНК, используемая для репликации матричной цепи. Каждый из праймеров комплементарен одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. 

Литература

  1. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. — М.: Мир, 2002. — 589 с., илл. ISBN 5-03-003328-9
  2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия — Новосибирск: Сиб. унив. изд-во, 2004. — 496 с.; илл. ISBN 5-94087-098-8
  3. Патрушев Л.И. Искусственные генетические системы — М.: Наука, 2005 — В 2 т. — ISBN 5-02-033278-X
  4. http://ru.wikipedia.org/wiki

Информацию из данного раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. В случае боли или иного обострения заболевания диагностические исследования должен назначать только лечащий врач. Для постановки диагноза и правильного назначения лечения следует обращаться к Вашему лечащему врачу.

www.invitro.ru

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) диагностика: что это такое

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания. Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе. Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

ПРЦ-исследование, что это такое?

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

  • микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды, трихомонады, гонококки);
  • бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
  • иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

Как происходит сдача анализов на ПЦР

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

  • кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
  • мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
  • как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
  • из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
  • как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
  • из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
  • из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Подготовка к исследованию

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Подготовка к ПЦР у мужчин

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

  • мочиться за 3 часа до исследования;
  • производить спринцевание и стерильную обработку члена;
  • мыть член мылом, содержащим антибиотик;
  • заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;
Читайте также:  Как расшифровывается СА-125 и какова его норма у женщин

Подготовка к ПЦР в гинекологии

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

  • при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
  • использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
  • за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
  • использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
  • занятия сексом за 48 часов до исследования;
  • применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
  • спринцеваться;
  • принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
  • сдавать ПЦР во время менструации.

Общие сведения при исследовании мочи для мужчин и женщин

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

  • мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
  • изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
  • использовать уросептики;
  • применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
  • заниматься сексом за 12 часов до исследования;
  • при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка результатов ПЦР

Примерный бланк исследования

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна. То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники. Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Широкий спектр исследований

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

  • микоплазмы гениталиум (mycoplasma genitalium) и гоминис (hominis);
  • трихомонады (trichomonas);
  • хламидии (chlamydia trachomatis);
  • уреаплазмы (ureaplasma, включающая ureaplasma parvum (уреаплазмы парвум));
  • кандиды (candida);
  • гарднереллы (gardnerella vaginalis);
  • гонококк (neisseria gonorrhoeae);
  • антитела IgG, IgM;
  • герпеса двух типов.

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

ПЦР исследование на ВИЧ

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

Плюсы и минусы ПЦР

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

  • чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
  • широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
  • точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
  • скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.

Минусы:

  • стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
  • требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
  • требования к подготовке.

Видеозаписи по теме

Интересное

   

tvojajbolit.ru

Анализ ПЦР — самая точная диагностика на инфекции

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это современный инструмент диагностики разнообразных инфекций, отличающийся высокой точностью. Анализ ПЦР позволяет определять возбудителей инфекционных заболеваний, опираясь на их генетический материал (РНК или ДНК). Биологическим материалом для исследования может служить кровь, мазок из половых органов, слюна и прочее. НАЖМИТЕ, ЧТОБЫ ЗАПИСАТЬСЯ

Метод ПЦР  был открыт в 1983. Его создатель Кэри Мюллис (США), за это открытие получил Нобелевскую премию в области химии. Уже за первые десять лет методика стала обязательным лабораторным исследованием во всем мире, получив признание ученых и врачей.

Медицинский центр Диана предлагает провести исследование по методике полимеразной цепной реакции в кратчайшие сроки и с высочайшим уровнем точности. Наша диагностическая база соответствует всем международным стандартам и требованиям.

Какие инфекции можно диагностировать методом ПЦР

На диагностику отправляют гинеколог, уролог или дерматолог. Анализ ПЦР дает возможность диагностировать большое число разнообразных инфекций. В эту группу попадают и скрытые, бессимптомные заболевания, находящиеся в инкубационном периоде:

С помощью метода ПЦР можно обнаружить:

  • гепатит C, B;
  • уреаплазмоз половых органов;
  • ИППП – уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез,;
  • хламидиоз половых органов и дыхательных путей;
  • микоплазмоз половых органов и дыхательных путей;
  • бактериальный вагиноз;
  • кандидоз половых органов;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • туберкулез;
  • сальмонеллез;
  • туберкулез (легочные и внелегочные формы);
  • листериоз, клещевые энцефалиты, болезнь Лайма;
  • цитомегаловирусную, папилломавирусную, герпесную  инфекцию;
  • детские заразные болезни, выявляемые при беременности и до зачатия — краснуху, паротит, дифтерию, корь;
  • ВИЧ.

При каждом из вышеперечисленных заболеваний, обнаруженным другим методом, желательно делать и ПЦР — исследование. Возбудители многих инфекций имеют несколько типов (штаммов), а более точная диагностика делает лечение эффективнее. Поскольку разные типы возбудителей обладают своими способами передачи инфекции, точное определение возбудителя помогает уберечь от заражения окружающих. Например, гепатитом А можно заразиться через общие предметы и посуду (болезнь грязных рук), а гепатитом С — только через кровь, медицинские инструменты и половые контакты. Это важно для тех, кто находится рядом с больным.

Суть метода полимеразной цепной реакции

Метод основан на выявлении возбудителя по участкам ДНК или РНК. ПЦР напоминает криминалистику, когда преступника находят по частичкам кожи или волосам, оставленным на месте преступления. Поскольку каждый живой организм имеет уникальную структуру ДНК или РНК. Метод позволяет безошибочно идентифицировать микроорганизм, даже если он присутствует в исследуемом материале в минимальных количествах. ПРЦ подходит для выявления скрытого носительства, нетипичных, стертых и прочих форм заразных заболеваний. Диагностика отличается высокой точностью, поэтому практически не дает ошибок и ложных результатов. Анализ часто назначается, как дополнительное обследование, чтобы выявить конкретный тип вируса или микроба.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

  • Универсальность. Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
  • Специфичность. ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
  • Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
  • Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
  • Возможность проведения количественного анализа. Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида  в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка 

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

  • Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
  • Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
  • С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Мазок у женщин

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут . При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

  • За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
  • За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
  • За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
  • Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
  • За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Мазок у мужчин

Подготовиться к забору мазка из мочеиспускательного канала для проведения ПЦР несложно. Достаточно соблюдать изложенные ниже правила.

  • За 2 суток до ПЦР обследования нужно начать воздерживаться от сексуальных отношений.
  • Прием лекарств прекращается приблизительно за 7 дней до проведения анализа, если, конечно же, они не были специально назначены врачом.
  • Гигиена половых органов должна проводиться накануне вечером, в день анализа ПЦР это делать не стоит.
  • Рекомендуется не мочиться примерно 2-3 часа перед сдачей анализа.

Анализ крови

Если в процессе ПЦР анализа объектом изучения станет кровь пациента, правила подготовки к нему следующие.

  • Оптимальное время для сдачи крови – утро, анализ нужно обязательно сдавать натощак (минимум 8 часов отсутствия пищи). Воду можно пить свободно.
  • Отказ от алкоголя за сутки до ПЦР анализа, отказ от курения за час до него.
  • Если здоровье допускает такой вариант, от приема лекарственных средств рекомендуется на время отказаться.
  • Перед сдачей проб крови в обязательном порядке следует отдохнуть около 20 минут.
  • Накануне ПЦР исследования совершенно исключены эмоциональные и физические перегрузки, они могут сказаться на результатах анализа.

Как проводится тест ПЦР?

Для исследования берется любая среда, в которой может находиться возбудитель, но чаще всего используются:

  • Кровь сыворотка или плазма – для выявления множества возбудителей – вирусов гепатита B, C, D, G, герпеса, ВИЧ, цитомегаловируса;
  • Моча и сок простаты – при диагностике ЗППП;
  • Мокрота, плевральная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж – для диагностики легочных и внелёгочных форм туберкулеза;
  • Спинномозговая жидкость – для диагностики инфекций нервной системы;
  • Околоплодная жидкость – для определения внутриутробных заражений;
  • Мазок из зева – для выявления возбудителей инфекционного мононуклеоза и дифтерии; соскобы и мазки со слизистых  для диагностики ЗППП; клетки слизистой желудка и желудочный сок — для выявления бактерии хеликобактер, вызывающей гастрит и язву.

При одном взятии материала можно обнаружить сразу нескольких возбудителей, попавших в организм. Такая универсальность избавляет пациента от дополнительных обследований и лишних трат. Обнаружить и идентифицировать участки генетической информации удается при помощи специальных эталонных маркеров ДНК (праймеров) созданных для каждого известного возбудителя. Эталон позволяет найти «свой» фрагмент среди миллионов других. Если это происходит, запускается реакция полимеразной цепи.

ПЦР—реакция делает огромное число копий выявленного участка генной информации (репликацию). Важно, что реплицируются только участки ДНК и РНК, необходимые для проведения анализа. Поэтому так важны чистота эксперимента и умение персонала обращаться с аппаратурой и образцами. Цепная реакция протекает очень быстро, уже через два часа участок ДНК увеличивается в миллионы раз, что позволяет обнаружить и точно идентифицировать инфекцию. Для работы с эталонами пробирки помещают в специальный прибор. При помощи программы задается алгоритм, несколько раз меняющий температуру среды и влияющий на протекание реакции. Результат ПЦР виден сразу после окончания исследования.

Как расшифровать ПЦР анализ

Проведение ПЦР исследования позволяет не просто установить тип инфекции, присутствующий в организме больного, но и оценить его с количественной точки зрения (количество микробов). Расшифровка результатов количественного анализа ПЦР играет важную роль в обнаружении и проверке эффективности лечения большого числа хронических заболеваний, скажем гепатита C.

Результатом анализа ПЦР могут стать положительный и отрицательный ответы.

  • Отрицательный результат. Следы инфекции не были выявлены в биологическом материале, который являлся объектом исследования в процессе анализа ПЦР. Как правило, на основании отрицательного результата можно полагать, что в организме действительно отсутствует инфекция.
  • Положительный результат. Такой результат анализа ПЦР свидетельствует о том, что следы инфекционного заболевания присутствуют в биологическом материале пациента. Положительный результат анализа ПЦР характеризуется большой степенью точности.

Иногда инфицирование выявляется на фоне полного здоровья и отсутствия признаков заболевания. Некоторые больные считают, что анализ сделан неправильно, но реальная ситуация другая. Если ПЦР показала, что возбудитель в организме есть, значит, он там действительно находится. Просто инфекционные болезни никогда не начинаются сразу после заражения, имея инкубационный период различной продолжительности. Скрытый период может продолжаться очень долго, например, при СПИДе – несколько лет, пока какие-то механизмы не подтолкнут вирусы к размножению. Возбудитель определяется в организме носителей и тех, кто не долечился. Очень часто переходят в скрытую (латентную) форму различные ЗППП. В этом случае может понадобиться дополнительная лабораторная диагностика.

Точность расшифровки результатов ПЦР анализа

Метод ПЦР, позволяющий выявлять достаточно большое число инфекций, характеризуется повышенной точностью, чувствительностью и специфичностью. Эти характеристики говорят о том, что с помощью исследования ПЦР можно:

  • Максимально точно установить отсутствие или присутствие инфекционного возбудителя.
  • Максимально точно определить конкретную разновидность инфекционного возбудителя (специфичность).
  • Выявить инфекцию даже в том случае, когда она имеет скрытый характер. Речь идет о низком уровне присутствия в подвергаемом исследованию биологическом материале пациента ДНК микробов (чувствительность).

Преимущества метода ПЦР над иммуноферментным анализом и прочими иммунологическими инструментами выявления инфекции заключается в том, что он реже дает ошибочные результаты. То есть расшифровка анализа ПЦР значительно реже показывает отсутствие инфекционных микробов, если они есть в организме больного.

Кроме того, почти не бывает, чтобы расшифровка анализа выявляла наличие в организме несуществующей инфекции, то есть давала ложноположительные результаты.Разумеется, стопроцентно правильными результаты ПЦР назвать все же нельзя, поэтому необходимо обязательно дополнять это исследование другими методиками.

Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter

Поделиться ссылкой:

Tags: TORCH, анализы, анализы гинекология, анализы до беременности, анализы на инфекции, анализы урология, гарднереллез, герпес, инфекции, мазок, ПЦР, трихомониаз, уреаплазмоз, урология, хламидиоз

medcentr-diana-spb.ru

Что такое полимеразная цепная реакция, ПЦР анализ

ПЦР анализ, или полимеразная цепная реакция, — метод ДНК — диагностики, основанный на многократном увеличении молекул ДНК и РНК, характерных для того или иного патогенного микроорганизма. Для увеличения скорости копирования нуклеиновых кислот используются ДНК и РНК ферменты.

ДНК — диагностика: ПЦР анализ, достоинства метода

ДНК — диагностика — это один из наиболее современных, высокотехнологичных методов исследования в лабораторной диагностике.

  • Полимеразная цепная реакция, или ПЦР анализ, позволяет выявить в организме человека многие инфекционные заболевания, которые были вызваны вирусами  или возбудителями бактериальной природы.
  • С помощью данного анализа можно обнаружить болезни не только в острой стадии, но и во время инкубационного (скрытого) периода.

Данный метод исследования обладает многими преимуществами:

  • Возможность обнаружить конкретного возбудителя и целого ряда микроорганизмов;
  • Высокая точность: вероятность ложных результатов ничтожно мала;
  • Диагностика скрытых, вяло текущих заболеваний, не беспокоящих какими-либо проявлениями;
  • Быстрое получение результатов;
  • Использование биологического материала различного рода: крови, плазмы, сыворотки крови, мочи, кала, биологических  жидкостей, мокроты, слизи, выделений;
  • ПЦР анализ может быть качественный и количественный, то есть, не только выявлять вид возбудителя болезни, но и давать информацию о его количественном содержании в организме.

Описание, анализ крови методом ПЦР 

Одним из самых распространенных видов исследования является анализ крови методом полимеразной цепной реакции, ПЦР;

  • Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач.
  • В устоявшейся клинической практике ПЦР  анализы обычно сдают блоками, на определенные группы конкретных возбудителей. Например:

ПЦР — диагностика инфекций, передающихся половым путем, где одновременно выявляются:

ПЦР — диагностика бактериальных инфекций:

ПЦР — диагностика  вирусных инфекций,   ( вирусных гепатитов, герпеса и других ).

ПЦР — диагностика острых кишечных и респираторных инфекций.

Другие анализы методом ПЦР

Для данного анализа можно исследовать ряд других жидкостей организма: например, сок простаты, плевральную жидкость, спинномозговую, околоплодную, суставную, слюну и др..

  • Исследование практически не имеет отличий от анализа крови.
  • Происходит клонирование фрагментов нуклеиновых кислот различных возбудителей, методом полимеразной цепной реакции, ПЦР.
  •  На основе полученного результата специалисты делают вывод о наличии у человека какого-либо заболевания.

Полимеразная цепная реакция, анализ кала

Услышав жалобы на понос, рвоту, боли в животе, лечащий врач может направить клиента на сдачу ПЦР анализа кала.

  • На данный метод исследования затрачивается сравнительно небольшой промежуток времени.
  • Результаты пациент узнает уже через несколько часов.
  • Основными рекомендациями для получения достоверного результата является стерильность контейнера, в который будет помещен биологический материал,
  • а также исключение использования медикаментов, способных повлиять на работу кишечника или изменить окрашивание кала.

Проведение анализа мочи на ПЦР

  • Выявление инфекций, передающихся половым путем, чаще всего осуществляется посредством ПЦР исследования мочи.
  • Этот метод позволяет диагностировать, к примеру, вирус иммунодефицита человека, наличие в организме микроорганизмов рода Кандида.
  • Главным условием сдачи ПЦР анализа мочи является воздержание от половых контактов.
  • Женщинам также не следует сдавать мочу во время менструации.

Видео, ПЦР, полимеразная цепная реакция

Диагностика вирусных и бактериальных инфекций методом ПЦР

ПЦР диагностика позволяет выявить в организме наличие следующих инфекций:

  • Туберкулез;
  • вирус Эпштейна-Барра;
  • Токсоплазмоз;
  • Листериоз;
  • Опоясывающий лишай;
  • Цитомегаловирус;
  • Хламидиоз;
  • Клещевой энцефалит и многие другие;
  • При помощи ПЦР возможна диагностика вирусных гепатитов.
  • ВИЧ, вирус иммунодефицита человека, также может быть диагностирован посредством ПЦР теста.
  •  Данный метод обследования используется, например, для обнаружения ВИЧ у ребенка зараженной матери.

Высокая точность анализа ПЦР

Степень достоверности результата зачастую зависит от подготовки пациента.

  • Результат проведенного исследования всегда однозначен: либо отрицателен, либо положителен.
  • Но специалист не может поставить точный диагноз, руководствуясь только результатом теста ПЦР.
  • Он используется в качестве дополнительного обследования.
  • Для анализа крови методом ПЦР используется кровь, взятая из вены.

  • Причем, в случае, когда полимеразная цепная реакция проводится на ранних стадиях заболевания, есть вероятность ложноотрицательного результата.
  • Тогда необходимо повторное проведение процедуры через определенный период.

ПЦР анализ на ВИЧ и вирус герпеса

  • Методом ПЦР можно определить наличие ВИЧ-инфекции в организме.
  • Наличие ВИЧ — инфекции  также является одним из условий, при которых необходима сдача ПЦР анализа на вирус герпеса.
  • Обследование поможет обнаружить вирусную нуклеиновую кислоту за небольшой промежуток времени.
  • Для проведения исследования дополнительно может использоваться такой биологический материал, как мазок из уретры.
  • Перед процедурой отбора пациенту следует воздержаться от мочеиспускания в течение нескольких часов.

Диагностика туберкулеза методом ПЦР

Туберкулез также можно выявить по результатам анализа крови методом ПЦР.

  • Лечащие врачи дают пациентам направление на данное обследование для уточнения диагноза в спорных случаях.

Когда показан анализ ПЦР при беременности

  • ПЦР анализ как метод, используемый для диагностики огромного количества болезней, является обязательным для женщины во время беременности.
  • Обследование проводится для того, чтобы понять, имеет ли место угроза для нормального развития плода.
  • Обследование такого рода может быть назначено как в виде плановой процедуры, так и в случае, когда имеется подозрение на наличие каких-либо заболеваний.
  • Специалист может по результатам полимеразной цепной реакции сделать вывод о развитии определенных патологий в организме беременной женщины, а также о риске заражения плода.

Видео, ПЦР анализ на инфекции, зачем сдавать

Подготовка к проведению ПЦР анализа

Для максимально точного результата исследования клиент должен подготовиться процедуре отбора биологического материала. Среди рекомендаций по подготовке к сдаче крови выделяют:

  • Исключение тяжелых физических нагрузок;
  • Употребление «правильной» пищи (отсутствие в рационе алкоголя и жирной пищи).

Для продуктивной сдачи мочи необходимо:

  • Использовать стерильный контейнер для переноса жидкости;
  • Отбирать биологический материал утром, сразу после пробуждения;
  • Воздержаться от половых связей за несколько дней до процедуры.

Подготовка к отбору мазка включает в себя:

  • Гигиену половых органов с помощью обычной проточной воды, при отсутствии ароматных моющих средств;
  • Воздержание от мочеиспускания за некоторое время до сдачи биологического материала.

Видео, полимеразная цепная реакция в картинках

Что такое полимеразная цепная реакция, ПЦР анализ Ссылка на основную публикацию

analyzekrovi.ru

ПЦР анализ (6, 12): что это такое и как делают, расшифровка, как сдать качественный и количественный вариант исследования

ПЦР — метод полимеразной цепной реакции для обнаружения генетического материала (фрагментов ДНК или РНК) в исследуемом материале. Активно применяется в медицине и науке. Он известен более 30 лет, а сферы его использования постоянно расширяются.

Открытый в 1983 году американским ученым и лауреатом Нобелевской премии Кэри Мюллисом, он стал настоящим прорывом в сфере ранней диагностики инфекционных заболеваний. Дорогостоящий и сложный, однако очень информативный и точный, ПЦР помогает обнаружить в организме человека вирусы и бактерии даже в единичном количестве.

Что это такое?

ПЦР относится к молекулярно-генетическим тестам. Его работа основана на определении фрагментов ДНК и РНК возбудителей инфекции по определенной последовательности нуклеотидов в цепочке. Суть метода состоит в активизации репликации генетического материала бактерии или вируса. Чтобы запустить реакцию, достаточно единичных фрагментов ДНК или РНК патогена.

Анализ проводится в лабораторных условиях. С помощью специальных ферментных систем, специфических для искомой инфекции, ускоряется деление генетического материала патогена — каждый раз удваивается. Цепная реакция включает множество циклов. При каждом из них количество фрагментов нуклеотидных цепочек увеличивается в геометрической прогрессии. По окончании теста маркеров возбудителя становится настолько много, что определить их не составляет сложности.

Получается, если изначально в материале был фрагмент генетического материала вируса или бактерии, который было невозможно обнаружить, после ПЦР количество увеличивается в десятки раз и выявить его просто.

Метод ПЦР считается ультрачувствительным. Он отражает наличие инфекции в организме, даже если заражение состоялось недавно, иммунитет не успел на него отреагировать, а численность инфекционных агентов минимальна.

Бактерии или вирусы вносят изменения в ДНК человека, другими словами, «оставляют отпечатки». Реактивы, используемые при ПЦР, отыскивают их и заставляют многократно делиться. Поэтому установить инфицирование можно всегда, даже если заболевание развивается бессимптомно или возбудитель персистирует в латентном режиме.

ПЦР считается очень специфичным анализом. Ферментные системы нацелены на конкретный антиген и активны только против него. Достоверность метода достигает 100%. Если внутри организма нет малейших признаков искомой инфекции, то бишь, конкретной последовательности нуклеотидов (уникальна для каждого живого существа), исследование не даст положительный результат. Исключения есть, но они сведены к минимуму, поэтому ПЦР признан еще и высокоточным анализом.

Возможность сочетания ферментных систем, определения сразу нескольких видов инфекции, а также вероятность ее обнаружения в абсолютно любой биологической жидкости делает исследование универсальным. Наиболее активно ПЦР применяется в гинекологии и урологии, поскольку здесь распространены заболевания вирусной и бактериальной природы, среди которых, сложно диагностируемые и развивающиеся скрыто.

Что определяет анализ

Примером активного применения ПЦР выступает тест на отцовство. Другие сферы медицины его чаще используют при симптомах инфекционных патологий, повышенном риске их хронизации, высокой вероятности заражения больного опасными для жизни вирусами (гепатит, ВИЧ).

Гинекологи, андрологи и урологи назначают ПЦР на ИППП (Инфекции, Передающиеся Половым Путем), для выявления скрытых заболеваний. Кроме того, с его помощью можно найти признаки онкологического процесса, определенные иммуноглобулины. Все сильнее набирает популярность анализ ПЦР на туберкулез, применяется для обнаружения хеликобактер пилори, как основного провокатора гастрита и язвенной болезни желудка (на ПЦР отправляют кал или желудочное содержимое).

Частные лаборатории предоставляют возможность сделать комплексный скрининг. Можно пройти обследование сразу на 6, 12 инфекций.

Таблица — О каких возбудителях информируют комплексные анализы

С помощью метода выявляют некоторых паразитов (проводят ПЦР на лямблии, описторхов, аскарид), если анализ кала показывает отрицательный результат, несмотря на наличие симптоматики. С его помощью обнаруживают возбудителя гепатитов А, B, C, D, сифилис, Эпштейна-Барра, цитомегало-, папилломавирус.

Общие правила подготовительного периода перед любым анализом ПЦР включают:

  • исключение приема антибиотиков за 3 недели до теста;
  • исключение половых контактов за 2 суток;
  • соблюдение техники сбора материала (при домашней подготовке);
  • применение только стерильной аптечной тары для предоставления проб.

Нюансы зависят от того, какой именно биоматериал будет тестировать лаборатория. Должна сдаваться только та биологическая жидкость, которая вероятнее всего содержит наибольшие концентрации возбудителя. Если это моча, кал, мокрота, слюна, сперма, возможен самостоятельный сбор. Другие типы (мазки из цервикального или уретрального канала, ротоглотки, конъюнктивы) берет медицинский персонал в условиях медицинского учреждения.

Кровь

Забор проводит лаборант одноразовой вакуумной системой или шприцем. Для тестирования достаточно 1‒2 мл. Биоматериал собирают с утра, натощак. Специфических условий подготовки нет, как и потребности снижения физических нагрузок, исключения каких-либо продуктов накануне. Единственное требование — должно пройти достаточно времени после антибиотикотерапии.

Моча

Чаще всего изучается при подозрениях на резистентные к лечению инфекции мочевыводящих органов. Биоматериал — утренняя урина, собранная вскоре после пробуждения, перед завтраком. Для доставки пробы используют стерильный контейнер с крышкой, приобретенный в аптеке или выданный лабораторией. Собирают только среднюю порцию (первую и последнюю спускают в унитаз). Сразу закрывают, транспортируют для анализа на протяжении 2 часов.

Накануне не желательно принимать диуретики или увеличивать обычный суточный объем жидкости. Женщинам нельзя спринцеваться за 3 суток. За 2 дня представители обоих полов должны отказаться от секса. Перед анализом нельзя принимать нефропротекторы с растительным составом, уроантисептики. Перед сбором мочи нужно не забыть подмыться, чтобы бактерии с наружных половых органов не попали в биоматериал.

Мазок из уретры

Забор делают в лаборатории или поликлинике. Наружное отверстие уретры очищают от выделений с помощью физраствора. Специальную щетку со щетинистой головкой погружают на 2‒4 см в уретральный канал, делают циркулярное движение, извлекают приспособление и основную контактирующую часть срезают в пробирку со специальным раствором (выступает своеобразной питательной средой).

Непосредственно перед анализом за 3 часа нельзя мочиться. Запрещается проводить гигиенические процедуры с использованием антисептиков или антибактериальных растворов. Нельзя спринцеваться и заниматься сексом за 2 суток до диагностики.

Гинекологические мазки

Проводятся в лаборатории. Женщина занимает положение в гинекологическом кресле. Лаборант или врач с помощью физраствора убирает слизь и выделения бартолиновых желез снаружи половых органов. Если необходим мазок из влагалища, специальным зондом со щетинистой головкой делают циркулярное движение в нижней части заднего свода. Рабочую часть устройства срезают в пробирку с раствором. При заборе из цервикального канала зонд погружают вглубь шейки до 1,5 см.

ПЦР влагалищного мазка часто назначают беременным женщинам, при симптомах ИППП или повышенном риске их хронизации, а также при поисках причин бесплодия. Перед анализом нельзя иметь интимные связи, спринцеваться, использовать антисептики для подмываний или свечи с антибактериальным действием.

Мазок из ротоглотки

Берет лаборант или врач. Головкой зонда проводят по задней стенке глотки, миндалинам, небным сводам, которую затем срезают в пробирку. Анализ берут строго натощак. Перед ним нельзя использовать антибактериальные спреи или леденцы.

Другие материалы

Для выявления возбудителя туберкулеза анализируют мокроту, которую больной собирает с утра с помощью стерильного контейнера (подходит также для ПЦР слюны). Кал также сдают в специальной емкости, причем нет смысла наполнять ее. Достаточно просто взять небольшую пробу ложкой, которой укомплектован стерильный сосуд.

Забор мазка из конъюнктивы проводит лаборант, снимая образец с поверхности нижнего века. Содержимое желудка получают аспирационным путем, при гастроскопии. На анализ могут отправить массы, или биоптат со стенки органа.

Виды и результаты ПЦР

Полимеразная цепная реакция способна отразить не только наличие возбудителя, но также его примерную концентрацию в единице биоматериала (например, 1 мл крови, мочи, слюны). Выявление, а также идентификация бактерий либо вируса называется качественным ПЦР-анализом. Он может дать только 2 варианта ответа — есть возбудитель в организме или нет.

Это уместно для диагностики заболеваний даже на ранних сроках после заражения. С помощью ПЦР можно проверить наличие инфекции в крови в инкубационном периоде развития или во время «серологического окна» (когда иммунитет еще не выработал антитела, а ИФА-тест отражает отрицательный результат, несмотря на высокую вероятность заражения). Нормой по всем возбудителям считается отрицательный результат. Если он положительный — в организме есть инфекция.

Чтобы оценить концентрацию болезнетворных агентов, проводят количественные ПЦР анализы. Они указывают, сколько именно копий РНК или ДНК возбудителя обнаружено в расчете на единицу измерения биоматериала. Результат указывают в международных единицах (МЕ/мл). Количественный тест определяет:

  • вирусную или бактериологическую нагрузку на организм;
  • степень активности инфекции;
  • необходимость начала терапии;
  • эффективность назначенного лечения.

Качественный и количественный ПЦР одинаково важны при диагностике и лечении ВПЧ, ВИЧ, гепатита С. При перечисленных заболеваниях назначают мощные противовирусные препараты, а контроль изменения концентрации возбудителя позволяет корректировать дозы, снижая риск развития побочных эффектов. Хорошим анализом считается такой, результат которого приближен к минимальному порогу чувствительности теста (10-50 МЕ/мл), однако это не исключает необходимости продолжать терапию.

Информативность ПЦР анализа и его точность актуальны при диагностике многих заболеваний. Однако метод этот сложный, а его выполнение требует строгого соблюдения техники и правил. В противном случае возможно получение не достоверного результата (ложного). Ложноположительные данные получаются при:

  • попадании в пробу соскоба крови;
  • загрязнениями биоматериала примесями эпителия и слизи;
  • нарушении стерильности условий проведения анализа.

Ложноотрицательный результат теста возможен при неправильной транспортировке проб в лабораторию (нарушения температурного режима, воздействие внешних условий), применении непригодных для анализа реактивов.

Это интересно!

Один из разновидностей ПЦР анализа — ПЦР real-time. Особенностью исследования является более тщательное изучение и дифференциация материала, потенциально относящегося к патологическому. Удобнее объяснить разницу на примерах.

После лечения какой-то инфекции антибиотиками в организме человека еще некоторое время будут находиться остатки патогенов (их клеточные стенки, части РНК или ДНК). Проведение обычной ПЦР сразу после лечения также даст положительный результат, но инфекции как таковой уже нет. Именно поэтому для достоверности анализа рекомендуется соблюдать интервал после терапии антибиотиками минимум в три недели.

Выполнение ПЦР real-time сразу после лечения даже при наличии фрагментов патогенов, но при отсутствии активных форм, даст отрицательный результат. То есть это более чувствительный анализ, который лишен мельчайших недостатков.

Часто задаваемые вопросы

Вопрос: Где лучше сдавать анализ, в частной или государственной лаборатории?

Ответ: Проходить исследование следует в крупных и известных медицинских учреждениях. Как правило, они располагают наиболее современным и высокоточным оборудованием, качественными реактивами. Это повышает информативность теста и его точность. Кроме того, частные лаборатории обеспечивают пациентов расходниками, необходимыми для правильной доставки проб.

Вопрос: Сдавать мазок из уретры больно или нет? Все знакомые говорят по-разному.

Ответ: Ощущения сугубо субъективные. Как правило, женщины переносят процедуру легко. Мужчины испытывают дискомфорт, что спровоцировано анатомическими особенностями строения уретры. Задача лаборанта — не допустить попадание крови в образец, поэтому нужно быть готовым к незначительным и кратковременным неприятным ощущениям.

Вопрос: Сколько делается комплексный анализ ПЦР? Можно ли попросить сделать тест срочно?

Ответ: Продолжительность проведения анализа варьируется от 5 до 8 часов. Процесс обработки результатов может занять несколько больше времени. Рассчитывать на результат можно спустя 1‒2 суток. Крупные, оснащенные по последнему слову техники лаборатории могут предоставить протокол исследования через несколько часов. Вопрос срочности следует решать индивидуально.

Вопрос: Можно ли сдавать полимеразную цепную реакцию вместо пробы Манту? Например, собирая ребенка в детский сад?

Ответ: Возможность замены тестов следует обсуждать с руководством заведения. Некоторые детсады и школы действительно разрешают приносить результаты ПЦР на туберкулез родителям, которые не хотят делать своим детям Манту. Однако нужно учитывать, что достоверность анализа относительно микобактерий туберкулеза несколько снижена, что обусловлено различными концентрациями возбудителя в биологических средах организма. Чтобы получить точный результат, следует сдавать на ПЦР мазок из зева, мокроту либо мочу.

Вопрос: Почему ИФА показывает положительный результат, а ПЦР — отрицательный?

Ответ: Иммуноферментный анализ направлен на поиск в крови антител к специфическим антигенам инфекций. Метод отражает не только сам факт заражения, но и реакцию иммунитета на этот процесс. ПЦР ищет непосредственно возбудителя. ИФА будет положительным еще некоторое время после лечения антибиотиками, тогда как ПЦР покажет отсутствие инфекции в крови. Кроме того, на похожие антигены могут вырабатываться сходные антитела, что также обуславливает позитивный результат ИФА при негативном тесте ПЦР. Редко для дополнения теста ИФА приходится сдавать бакпосев.

Выводы

ПЦР — универсальный, точный, специфичный и информативный способ диагностики инфекционных заболеваний. Его используют для раннего обнаружения опасных бактерий и вирусов в организме. Референтное значение результата анализа — «отрицательный» относительно всех искомых возбудителей. Тест назначают для идентификации провокатора заболевания и правильного подбора терапии. ПЦР применяется и в процессе лечения, для определения вирусной нагрузки.

cc-t1.ru

ПЦР анализ: что это такое?

Диагностика методом ПЦР на сегодняшний день является самым эффективным способом обнаружения и идентификации возбудителей половых инфекций в человеческом организме.

В этой статье мы разберем, что такое анализ ПЦР, как и где сдать этот тест.

Вы узнаете, какова цена этого исследования, где выполняют ПЦР анализы и как готовится, когда требуется сдать ПЦР анализ.

Вы узнаете о методиках забора мазков, какой врач берет анализы на ПЦР и почему медсестра плохо берет мазки на ПЦР анализ.

Разберем ПЦР анализ: что это такое и как выполняют это исследование.

ПЦР анализ: что это такое?

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, представляет собой метод лабораторного исследования различных биологических жидкостей.

В них происходит анализ на предмет присутствия возбудителей инфекционных, паразитарных или вирусных заболеваний.

Суть ПЦР состоит в многократном «клонировании» находящихся в исследуемом материале фрагментов ДНК инфекционного агента.

ПЦР диагностика инфекций считается наиболее быстрым, современным методом.

ПЦР диагностику используют повсеместно.

Все ведущие клиники  используют диагностику ПЦР для верификации инфекционных заболеваний.

Часто пациенты спрашивают, какие именно заболевания можно выявить при помощи метода ПЦР диагностики?

Диагностика методом ПЦР используется для выявления широкого спектра возбудителей.

Как делают ПЦР анализ?

Такое исследование проводится одинаково для диагностики любого заболевания.

Разница может быть лишь в исследуемом субстрате.

Для этого пробирку с биоматериалом помещают в реактор, где с помощью катализаторов происходит процесс копирования молекул ДНК возбудителя инфекции.

ПЦР диагностика: расшифровка

Давайте разберем, как проводится расшифровка ПЦР диагностики.

Метод ПЦР очень быстрый и простой.

В качестве результата, вы получаете заключение врача лаборанта.

В результате четко будет прописано: получен положительный результат или отрицательный.

Ответ приходит на конкретную инфекцию.

Когда вы сдавали палитру инфекции напротив каждого возбудителя будет указано получен положительный или отрицательный результат.

Если вы сомневаетесь в результатах, покажите бланк вашему лечащему врачу.

Доктор поможет интерпретировать результат ПЦР и подберёт правильное лечение.

Помните!Исследование методом ПЦР не всегда можно использовать в медицинской практике.

Такие исследования не проводятся при контрольном тестировании после проведения лечения.

Когда берется ПЦР анализ после лечения, при разных инфекциях, можно получить положительный результат, который будет ложным.

Это связано с тем, что частички убитых возбудителей, уже неактивные, могут давать положительную реакцию.

Если вы сомневаетесь, можно ли вам сдавать ПЦР или нет, проконсультируйтесь с врачом.

Разберем, какие материалы могут быть применены для тестирования ПЦР.

в качестве материала для исследования методом ПЦР

Что может быть использовано в качестве материала для исследования методом ПЦР:

Врач всегда рекомендует определенные анализы.

Тем не менее, существует определенный перечень материалов, которые покажут наиболее точные результаты.

Тем не менее, существует определенный перечень материалов, которые покажут наиболее точные результаты.

  • Соскобы со слизистых оболочек (чаще всего уретры, влагалища, шейки матки). Их исследуют, главным образом, для диагностики половых инфекций. Таким способом во взятом мазке можно обнаружить возбудителей уреаплазменной и микоплазменной инфекций, гонококки, хламидии, трихомонады, гарднереллы, грибки рода Candida, вирус генитального герпеса и др.
  • Моча. Ее можно использовать в диагностике урогенитальных инфекций. ПЦР анализ мочи является альтернативой исследованию мазка из уретры для мужчин. Это особенно подходит тем пациентам, которые боятся болезненного взятия уретрального мазка.
  • Бронхиальная слизь. Может исследоваться с целью диагностики респираторных форм хламидийной и микоплазменной инфекций.
  • Кровь. Анализ крови ПЦР – это один из самых точных способов выявления в организме некоторых патогенных вирусов.

Такое исследование позволяет диагностировать:

  • вирусные гепатиты
  • генитальный герпес
  • цитомегаловирусную инфекцию
  • ВИЧ
  • Другие биологические жидкости: секрет предстательной железы, околоплодная жидкость, слюна и др.

kvd-moskva.ru


Смотрите также